人淋巴細(xì)胞CIK（Cytokine-InducedKiller）治療的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)流程主要分為幾個(gè)步驟，具體包括淋巴細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、激活及擴(kuò)增。以下是一個(gè)常見(jiàn)的培養(yǎng)流程：
1.樣本收集與淋巴細(xì)胞分離
采集外周血：使用抗凝劑（如肝素）從患者或供體采集外周血。
分離外周血單核細(xì)胞（PBMC）：使用密度梯度離心（如Ficoll-Paque）分離出外周血單核細(xì)胞（PBMC）。
2.細(xì)胞激活
培養(yǎng)基選擇：常用的培養(yǎng)基為RPMI-1640或IMDM培養(yǎng)基，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/鏈霉素。
細(xì)胞激活劑：添加刺激淋巴細(xì)胞增殖的細(xì)胞因子，常見(jiàn)的細(xì)胞因子包括：
IL-2（白介素-2）：激活T細(xì)胞的增殖和擴(kuò)增。
IFN-γ（干擾素-γ）：促進(jìn)細(xì)胞毒性作用。
抗CD3抗體（如OKT3）或者其他T細(xì)胞受體激活劑。
抗CD28抗體：增強(qiáng)T細(xì)胞的激活反應(yīng)。
激活過(guò)程通常在37°C、5%CO?的條件下進(jìn)行，培養(yǎng)時(shí)間為2-3天。
3.擴(kuò)增培養(yǎng)
在激活后細(xì)胞需要繼續(xù)擴(kuò)增，通常會(huì)在培養(yǎng)基中添加更多的IL-2，以維持細(xì)胞的增殖。細(xì)胞數(shù)量一般會(huì)在3-5天內(nèi)顯著增加。
為了維持細(xì)胞活性和增殖，定期更換培養(yǎng)基（大約每?jī)商煲淮危⒀a(bǔ)充IL-2。
4.細(xì)胞收獲
細(xì)胞檢測(cè)：使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CIK細(xì)胞的純度和細(xì)胞毒性。
細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，通過(guò)離心收集細(xì)胞，進(jìn)行后續(xù)的應(yīng)用或治療。此時(shí)CIK細(xì)胞通常已具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性活性。
5.質(zhì)量控制
細(xì)胞鑒定：通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或PCR鑒定細(xì)胞的標(biāo)志物，例如CD3、CD56、CD8等。
細(xì)胞功能測(cè)試：檢測(cè)CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性，包括對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果。
6.凍存（可選）
如果需要長(zhǎng)期保存，可以將CIK細(xì)胞進(jìn)行凍存。使用適當(dāng)?shù)膬龃嬉海ㄈ绾蠨MSO的凍存液）進(jìn)行低溫保存。
培養(yǎng)基配方（常見(jiàn)示例）：
RPMI-1640培養(yǎng)基
10%FBS
1%青霉素/鏈霉素
10ng/mlIL-2（用于增殖和激活）
50ng/mlIFN-γ
抗CD3抗體（可選）
注意事項(xiàng)：
培養(yǎng)環(huán)境：保持37°C，5%CO?環(huán)境，確保細(xì)胞生長(zhǎng)良好。
細(xì)胞因子的添加：根據(jù)需要可以調(diào)整IL-2和IFN-γ的濃度，以優(yōu)化細(xì)胞增殖和功能。
此流程為基礎(chǔ)的CIK細(xì)胞培養(yǎng)流程，具體的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)可以根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行調(diào)整。
