人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司的干細(xì)胞研究產(chǎn)品主要包括：生長因子、通路調(diào)控因子、干細(xì)胞培養(yǎng)基、細(xì)胞株等，并且在倉庫備有人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基現(xiàn)貨。歡迎新老客戶：   

    Human MSC medium (Chemically-Defined) 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基間充質(zhì)干細(xì)胞具有光明的臨床治療前景。然而，常用培養(yǎng)基含有胎牛血清（FBS），增加了病原體、異種抗原、批間不穩(wěn)定性。美國FDA正考慮禁止使用FBS于細(xì)胞治療。提供的Human MSC medium ( Chemically-Defined )，是一種無血清、無異種蛋白、化學(xué)成分明確的人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，且無需昂貴的鋪板蛋白，生長分化更優(yōu)于血清培養(yǎng)基。
    該培養(yǎng)基是為擴(kuò)增從骨髓、臍帶血或脂肪組織提取的人類間充質(zhì)干細(xì)胞而設(shè)計(jì)的無血清培養(yǎng)基。它化學(xué)成分明確，所有組分為化學(xué)合成或重組純化的蛋白。它無異源蛋白，不含直接從任何動(dòng)物組織提取成份。因此它不存在批間誤差和潛在的動(dòng)物源性病原體。如果配合使用特定的培養(yǎng)板，還可以省去鋪板的工序和時(shí)間，免去鋪板膠的費(fèi)用。
本產(chǎn)品組成及保存Human MSC medium (Chemically-Defined)（ 人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基貨號MGro-500）
產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品組成           規(guī)格      儲(chǔ)存                     保質(zhì)期      
 
基礎(chǔ)液           450ml        2 ‐ 8°C, 避光保存      6個(gè)月

添加物            50ml       ‐ 80°C, 避光保存        6個(gè)月
 

重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公公司還可以提供：其它所需試劑：
? L‐谷氨酸鹽（L‐Glutamine),或同類產(chǎn)品；
? 選擇不鋪板：建議使用BD公司的培養(yǎng)板或 Corning公司的培養(yǎng)板
? 選擇鋪板：Fibronectin或同類產(chǎn)品；
? 胰酶Trypsin 0.05%/0.53mM EDTA或同類產(chǎn)品；
培養(yǎng)基配制：
1.解凍添加物。建議2‐8°C解凍。解凍后的溶液可以分裝，于‐80°C保存，盡量避免反復(fù)凍融。
2.配制100ml人間充質(zhì)干細(xì)胞*培養(yǎng)基，需在無菌條件下添加10ml添加物于90ml基礎(chǔ)液中，再加入1ml 200mM L‐谷氨酸鹽；
3.如果需要也可加入抗菌素（自選）。
    配制好的*培養(yǎng)液（包含基礎(chǔ)液、補(bǔ)充液、谷氨酸鹽）2‐8°C避光保存，保存期為1個(gè)月。從其它培養(yǎng)基向本產(chǎn)品逐漸培養(yǎng)于其它無血清或有血清培養(yǎng)基的MSCs可以快捷方便地轉(zhuǎn)換到該產(chǎn)品培養(yǎng)。多數(shù)情況下，直接轉(zhuǎn)換便可。個(gè)別情況下，可能需要逐步轉(zhuǎn)換，如20%, 40%,依次遞增。
復(fù)蘇hMSCs細(xì)胞：
1.37°C水浴快速復(fù)蘇凍融細(xì)胞。
2.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到50ml離心管中。
3.逐滴向裝有1ml細(xì)胞液的離心管中加入10ml預(yù)先復(fù)溫的人間充質(zhì)干細(xì)胞*培養(yǎng)基，注意邊加邊輕輕晃動(dòng)離心管。
4.將上述混合溶液轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)瓶或細(xì)胞培養(yǎng)板中。或者可250xg（～1200rpm）離心10min，再用*培養(yǎng)基重懸后再轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)板中。
5.在4-6%CO2，36‐38°C培養(yǎng)箱孵化。
6.孵化24h，換一次培養(yǎng)液。
7.此后每隔2天換一次液，直到傳代培養(yǎng)。
傳代培養(yǎng)：
    當(dāng)使用特定的細(xì)胞培養(yǎng)板，如BD PrimariaTM系列或corning CellBINDTM系列時(shí)，使用該培養(yǎng)基是不需要預(yù)先鋪板。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板正在評估中。對于那些還沒有被評估的產(chǎn)品或不適用于不預(yù)先鋪板工序的產(chǎn)品，推薦使用Fibronectin進(jìn)行鋪板。
1.在鏡下觀察細(xì)胞，確定傳代的時(shí)間。為了保證MSCs的生長潛力，推薦在細(xì)胞量達(dá)到70%滿的時(shí)候傳代。如果細(xì)胞量達(dá)到80%以上滿時(shí)，細(xì)胞在傳代之后可能出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象。切記，在任何情況下，不要讓細(xì)胞超出80%滿！
2.預(yù)先將0.05%胰酶和*培養(yǎng)基復(fù)溫到37°C待用。
3.用移液槍吸走舊培養(yǎng)基。
4.用DPBS洗一遍（自選）。
5.加入0.05%胰酶以覆蓋住細(xì)胞表面，推薦室溫消化細(xì)胞（消化液用量：6孔板每一孔約10cm2加入0.5ml，25cm2培養(yǎng)板加入1ml）。
6.鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)看見細(xì)胞開始從培養(yǎng)板剝離，輕輕敲擊培養(yǎng)板邊緣幫助細(xì)胞脫落。消化時(shí)間為1‐3分鐘。注意，消化時(shí)間會(huì)比在有血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞要短。當(dāng)所有細(xì)胞都脫落時(shí)，快速采取以下步驟。（不要在所有細(xì)胞都脫落后，保持在胰酶中太長時(shí)間，因?yàn)檫@樣會(huì)影響MSCs以后的生長狀態(tài)）。
7.加入2倍于消化液的*培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液收集于15ml離心管中。（如果是使用胰酶消化細(xì)胞，可以使用大豆酶抑制劑來終止胰酶。尤其是當(dāng)以下步驟8洗細(xì)胞不能在10分鐘內(nèi)被完成的情況下，這一步是非常必要的。原因是這類無血清培養(yǎng)基中都不含抗胰蛋白酶。除非快速離心分離，否則培養(yǎng)基中留存的胰蛋白酶會(huì)破壞細(xì)胞并影響其生長能力。）
8.1200rpm離心10分鐘。
9.盡量棄去離心后的上層清液。用*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。此時(shí)可取細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
10.按照3~5X103細(xì)胞量/cm2接種細(xì)胞。上下左右輕輕搖勻細(xì)胞以保證細(xì)胞在培養(yǎng)板里的均勻分布。細(xì)胞接種密度：6孔板每一孔約10cm2約3~5X104細(xì)胞，25cm2培養(yǎng)板約0.75~1.25X105細(xì)胞。
11.4~6%CO2，37°C培養(yǎng)。
12.每隔2天換新鮮的*培養(yǎng)基。
13.當(dāng)細(xì)胞量達(dá)到70%滿時(shí)，傳代（一般每隔3-4天）。
凍存細(xì)胞:
1.配制細(xì)胞凍存液：90%*培養(yǎng)液 + 10%DMSO。
2.離心分離細(xì)胞，用凍存液重懸細(xì)胞，使細(xì)胞密度為1~5x106/ml，轉(zhuǎn)移到凍存管中。
3.將凍存管轉(zhuǎn)移到凍存盒中，依次置于4度-負(fù)20度- 負(fù)80度冰箱。
4.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中長期貯存。
僅供研究研究使用，不用于人的診斷及治療。

有關(guān)其他重慶華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司代理的美國Stem RD公司的產(chǎn)品如下：EGF-50 EGF, human EGF, 人 50 ug
EGF-250 EGF, human EGF, 人 250 ug
EGF-1000 EGF, human EGF, 人 1000 ug
FIBRO-10 fibronectin, human plasma fibronectin, 人 1 mg
IGFLONG-100 IGF-long, human IGF-long, 人 100 ug
INS-1000 insulin, human insulin, 人 1000 ug
MGro-50 MSC medium, chemically-defined, sample MesenGro, MSC 培養(yǎng)基，化學(xué)成分明確，試用裝 50 mL
MGro-500 MSC medium, chemically-defined MesenGro, MSC 培養(yǎng)基，化學(xué)成分明確 500 mL
PGro-50 PSGro, human iPSC/ESC medium, sample PSGro, 人 iPSC/ESC 培養(yǎng)基，試用裝 50 mL
PGro-500 PSGro, human iPSC/ESC medium PSGro, 人 iPSC/ESC 培養(yǎng)基 500 mL
PC-STR PSdif-Cardio® Starter Kit PSdif-Cardio, 人 iPSC to 心肌細(xì)胞定向分化 培養(yǎng)基套裝 3x 10 mL
PC-REG PSdif-Cardio® Regular Kit PSdif-Cardio, 人 iPSC to 心肌細(xì)胞定向分化 培養(yǎng)基套裝 3x 50 mL
Thia-01 Thiazovivin Thiazovivin 1 mg
Thia-05 Thiazovivin Thiazovivin 5 mg
Thia-25 Thiazovivin Thiazovivin 25 mg
TRANSF-10 transferrin, human transferrin, 人 10 mg
VPA-100 Valproic Acid Valproic Acid 500 mg
Y-01 Y-27632 Y-27632 1 mg
Y-05 Y-27632 Y-27632 5 mg
Y-25 Y-27632 Y-27632 25 mg
DKKFC-050 DKK-1 Fc fusion, human DKK-1 Fc 融合蛋白 , 人 50 ug
DKKFC-250 DKK-1 Fc fusion, human DKK-1 Fc 融合蛋白 , 人 250 ug
DKKFC-1000 DKK-1 Fc fusion, human DKK-1 Fc 融合蛋白 , 人 1000 ug
DKK-025 DKK-1, human DKK-1, 人 25 ug
DKK-100 DKK-1, human DKK-1, 人 100 ug
FSTFC-050 Follistatin Fc fusion, human Follistatin Fc 融合蛋白 , 人 50 ug
FSTFC-250 Follistatin Fc fusion, human Follistatin Fc 融合蛋白 , 人 250 ug
FSTFC-1000 Follistatin Fc fusion, human Follistatin Fc 融合蛋白 , 人 1000 ug
FL3FC-050 Follistatin like-3 Fc fusion, human Follistatin like-3 Fc 融合蛋白 , 人 50 ug
FL3FC-250 Follistatin like-3 Fc fusion, human Follistatin like-3 Fc 融合蛋白 , 人 250 ug
FL3FC-1000 Follistatin like-3 Fc fusion, human Follistatin like-3 Fc 融合蛋白 , 人 1000 ug

華雅干細(xì)胞主要在中國代理銷售BD、GE、Bio-Rad、NUNC、Nalgene、PALL、Axygen、Crystalgen等品牌的實(shí)驗(yàn)耗材類產(chǎn)品；在中國代理銷售Roche、LONZA、BD、GE、Bio-Rad、VWR、Vigorous、Cygnus、ExCell、R&D、ALPCO、Amresco等生物試劑；Bio-Rad、HEROS、VWR等生物儀器，更多產(chǎn)品歡迎與購買！
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