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| 品牌 | StemRD/美國 | 產地類別 | 進口 |
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PSGro人iPSC/ESC胚胎干細胞無血清培養基支持在細胞外基質蛋白(如BD Matrigel™)上的人iPSCs或人ESCs的無飼養生長和維持。其性能與市場*的mTeSR™1或E8相比，在生長速度、特征形態、插件標記、正常核型和向不同胚層的分化等方面都有一定的優勢。
PSGro人iPSC/ESC胚胎干細胞無血清培養基
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StemRD PGroF-500 PSGro-Free®iPSC/ESC Growth Medium 500mL/套
人iPSC/ESC胚胎干細胞生長培養基
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內容和存儲
PSGro-Free®（Cat。＃PGroF）包含兩個組件：
組件 | 尺寸 | 存儲 | 保質期 |
基礎培養基（在凝膠冰上） | 450毫升 | 2至8°C。 遠離光明 | 6個月 |
10x補充劑（干冰） | 50毫升 | -20°C或以下。 遠離光明 | 6個月 |
需要或建議的其他關鍵試劑
- 細胞外基質蛋白，例如Matrigel TM（BD，cat＃354277）或等同物
- Accutase（Millipore，SCR005）或Collagenase IV（Invitrogen，17104）或同等物
- ROCK抑制劑Y-27632（StemRD，Y-01 / -05 / -25）或Thiazovivin（StemRD，Thia-01 / -05 / -25）
中等準備
- 在4°C下解凍PSGro-Free®補充劑。 如果需要，可以將解凍的Supplement等分并儲存在-20°C或更低溫度下，但應避免進一步凍融。
- 要制備PSGro-Free®*培養基，將1份補充劑加入9份基礎培養基中。
- 如果需要，可以將抗生素添加到*培養基中。
- 一旦制成，PSGro-Free®*培養基在2至8°C的黑暗中儲存時可穩定2周。
具有細胞外基質蛋白的涂層板，例如Matrigel TM
請參閱制造商的說明。 對于BD Matrigel™，可遵循以下程序：
- 在冰上解凍Matrigel™。 用預冷的DMEM培養基稀釋基質膠1:50。
- 立即使用稀釋的Matrigel™溶液涂覆組織培養板。 對于6孔板，每孔使用1 mL稀釋的Matrigel™溶液，旋轉平板使溶液均勻涂抹。
- 讓板在37℃下放置1小時或在4℃下放置過夜。
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生長無飼養細胞適應PSGro-Free®
已經在較常用的hiPSC / ESC培養基中生長的人iPSC或ESC可以容易地適應PSGro-Free®。 用PSGro-Free®進行一輪1：1稀釋的含血清或無血清培養基通常就足夠了。 然而，對于某些媒體和細胞系，可能需要更長和更多的研究生適應。
生長飼養細胞依賴細胞適應PSGro-Free®
- 用Accutase，Collagenase IV或同等物質分離細胞。
- 添加以前使用的培養基，輕輕刮去細胞作為聚集體。 理想的聚集體尺寸與其他介質類似，過度移液的單細胞可能會降低電鍍效率。
- 將具有細胞聚集體的懸浮液轉移到15ml管中。
- 在室溫下以200×g離心5分鐘。
- 丟棄Matrigel™溶液，立即添加PSGro-Free®（例如，2 mL /孔用于6孔板）。
- 離心后，棄去上清液，用2mL先前使用的培養基輕輕重懸沉淀。 注意：向培養基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
- 用PSGro-Free®將先前使用的培養基中的細胞聚集體轉移到孔中。 混合。 輕輕地。
- 在37℃，5％CO 2和95％濕度下培養細胞。
- 如果星期五播種細胞，請在周一更換培養基至4 mL PSGro-Free®（周末無需更換）。 如果細胞在一周中的其他日子播種，則在第二天更換。
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PSGro-Free®中冷凍細胞的回收
- 在37°C水浴中快速解凍hiPSC或hESC，將內容物轉移至15 mL管中。 在溫和混合下將10mL先前用于細胞的培養基滴加到管中。
- 在室溫下以200×g離心細胞5分鐘。
- 丟棄Matrigel™溶液，立即添加PSGro-Free®（例如，2 mL /孔用于6孔板）。
- 離心后，棄去上清液，用2mL先前使用的培養基輕輕重懸沉淀。 注意：向培養基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
- 用PSGro-Free®將先前使用的培養基中的細胞聚集體轉移到平板上。 輕輕混合。
- 在37℃，5％CO 2和95％濕度下培養細胞。
- 第二天將培養基更換為4 mL PSGro-Free®。
在無飼養細胞條件下傳代PSGro-Free®中的細胞
- 在顯微鏡下觀察以識別分化區域。 使用平板底部的鏡頭標記（例如，6孔板）標記分化的菌落
- 通過用移液管*或抽吸刮擦去除分化區域。
- 從細胞培養物中吸出培養基并用PBS沖洗。
- 每孔加入0.5 mL Accutase或Collagenase IV。 在室溫下靜置1-2分鐘。
- 取出Accutase，用2 mL PSGro-Free®輕輕沖洗2-3次，以去除殘留的酶。
- 加入2 mL /孔PSGro-Free®并用細胞刮刀刮掉菌落。
- 將分離的細胞聚集體轉移至15 mL錐形管中，并用另外2 mL PSGro-Free®沖洗孔以收集任何剩余的聚集體。
- 在室溫下以200×g離心5分鐘。
- 吸出上清液。 通過輕輕移液將沉淀重懸于4 mL PSGro-Free®中。 注意：向培養基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
- 用PSGro-Free®將細胞聚集體鋪在涂有Matrigel™的新平板上。
- 在37℃，5％CO 2和95％濕度下培養細胞。 每天更換介質。
- 如果星期五播種細胞，請在周一更換培養基至4 mL PSGro-Free®（周末無需更換）。 如果細胞在一周中的其他日子播種，則在第二天更換。 注意：如果菌落處于*密度，細胞可以每隔5-7天分裂，使用1：5到1:10的分裂。
PSGro-Free®中細胞的低溫保存
- 準備含有90％PSGro-Free®和10％DMSO的冷凍培養基。 注意：向培養基中添加ROCK抑制劑（Y-27632或Thiazovivin）可顯著提高存活率和電鍍效率。
- 在無飼料條件下，從PSGro-Free®中傳代細胞進行步驟1-8
- 輕輕吸出上清液，注意保持細胞沉淀完整。
- 輕輕地將沉淀重懸于冷凍培養基中，注意使細胞聚集體比通常用于傳代的細胞更大。
- 將冷凍培養基中的1mL細胞聚集體轉移到每個標記的冷凍管中。
- 將小瓶置于異丙醇冷凍容器中，并將容器置于-80℃
- 第二天轉移到液氮罐中進行長期儲存。
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重慶市華雅干細胞技術有限公司主營：干細胞、細胞凍存、細胞治療、試劑耗材 相關板塊的產品，以“傳遞科學價值，服務科學研究”為宗旨，經過近五年的努力推廣，重慶市華雅干細胞技術有限公司在全中國代理的BD科研產品、OriGen干細胞凍存袋等產品已經成功銷往：上海市、北京市、重慶市、天津市、廣東省的廣州市、深圳市、珠海市、江西省的南昌市、四川省的成都市、綿陽、浙江省的杭州市、寧波、溫州、江蘇省的南京市、蘇州、無錫、泰州、湖南省的長沙、陜西省的西安市、楊凌、甘肅省的蘭州、寧夏的銀川、新疆的烏魯木齊、廣西的南寧市、山東省的濟南、青島、東北三省 遼寧省的沈陽市、大連市、吉林省的長春市、黑龍江省的哈爾濱市等中國絕大部分省市和自治區。
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